06年微生物复试试题
一, 名词解释(每题3分,共30分)
1,芽孢 某些细菌，特别是G+杆菌，生长到一定阶段，在细胞内形成一个圆形或椭圆形的、折光性强的特殊结构称为芽孢。
2,外毒素,内毒素,类毒素
外毒素—细菌细胞在生长繁殖过程中分泌到胞外培养液中的毒性蛋白，主要由G+细菌产生。
内毒素 是G-细菌细胞壁成分中的脂多糖，细菌自溶或裂解后，脂多糖释放出来。
类毒素 一些经变性或经化学修饰而失去原有毒性而仍保留其抗原性的毒素。
3,广谱抗生素
抗菌范围广泛的抗生素，不仅能强力抑制大部分革兰氏阴性菌和革兰氏阳性菌，而且能抑制立克次体、螺旋体和某些原虫
4,TD-Ag 胸腺依赖性抗原——在刺激 B 细胞产生抗体时需要 T 细胞的辅助，所以称为 TD-Ag 。（分子量大，表面多重抗原决定簇、可诱生多类Ig、可诱发体液和细胞免疫、课引起记忆反应。）
5,肿瘤特异性抗原 癌细胞形成与正常细胞不同的特有物质时,则该物质称为肿瘤特异性抗原(TSA)。是指一种肿瘤细胞特有的，不存在于正常组织细胞上的抗原。
6 ,膜攻击复合体
7 ,T辅助细胞
8 、菌落 细胞受固体培养基表面或深层的限制，故不能像在液体培养基中那样自由扩散，因此繁殖的菌体常聚集在一起，形成了肉眼可见的细胞集落。
9、转化（transformation）是某一基因型的细胞从周围介质中吸收来自另一基因型的细胞的DNA而使它的基因型和表型发生相应变化的现象。
10 ,
二,简答题(每题8分,共40分)
1,简述并图示霉菌的生活史
孢子开始，经过发芽、生长成为菌丝体，再由菌丝体经过无性和有性繁殖最终又产生孢子。
2,配制培养基时应注意哪些基本原则?
1、选择适宜的营养物质以满足微生物的营养需要
2、控制营养物质的浓度并注意各营养物的比例
3、调节微生物生长所需的适宜PH
4、灭菌处理并维持无菌状态。
3,质粒有哪些基本特性?
质粒 通常指细菌细胞内染色体外，能自主复制的遗传物质，共价、闭合、环状、双链的DNA分子，有超螺旋和开环式。
质粒的基本特征：①能自主复制②不相容性③所携带基因不是细胞生长所必需的④能以宿主细胞自发消除⑤可以从一个细菌转到另一个细菌。
4,机体的抗病毒免疫有哪些方面?
抗病毒免疫
病毒突破人体第一道防线后，干扰素和自然杀伤细胞（NK细胞）在第二道防线中占重要地位。
病毒进入机体后，能刺激人体的巨噬细胞、淋巴细胞以及体细胞产生干扰素。干扰素具有广谱抗病毒作用，它能诱生抗病毒白蛋白来阻断新病毒的产生，故有阻止病毒增殖和扩散作用。NK细胞是淋巴细胞中除T细胞、B细胞外的另一类细胞，它们占淋巴细胞总数的5-10%，一刻不停地在血循环中承担着“巡逻”任务。一旦发现有不正常的细胞，立即能释放穿孔素等将它们杀死。被病毒感染的宿主细胞属不正常细胞，因此亦在NK细胞攻击范围之内。
病毒逃脱了第二道防线抵御后，就面临第三道防线。这就是特异性体液免疫和细胞免疫。它们在对抗病毒感染中各有特定作用。特异性抗体可以中和存在于宿主细胞外的病毒。抗体与病毒结合后，病毒就不能与易感染细胞表面的相应受体结合而进入细胞，并且随后这些抗体和病毒的结合物就被吞噬细胞吞噬降解。对已进入易感染细胞的细胞内病毒，像胞内菌一样，抗体进不去，需要细胞免疫中的CD8 CTL细胞完成清除任务。CTL细胞破坏“藏”有病毒的感染细胞的过程是，首先CTL细胞与病毒感染细胞靠近并相互接触，然后CTL细胞放出穿孔素、粒酶等生物活性物质，再后CTL细胞离开，最后病毒感染细胞破裂死亡，释出的病毒则可被特异性抗体中和消灭。攻击被病靖腥鞠赴腃TL细胞离开后，还能以同样方式多次攻击其他感染细胞
5,简述Ames实验的基本原理及方法.
鼠伤寒沙门氏菌（Salmonella typhimurium）的组氨酸营养缺陷型（his－）菌株，在含微量组氨酸的培养基中，除极少数自发回复突变的细胞外，一般只能分裂几次，形成在显微镜下才能见到的微菌落。受诱变剂作用后，大量细胞发生回复突变，自行合成组氨酸，发育成肉眼可见的菌落。某些化学物质需经代谢活化才有致变作用，在测试系统中加入哺乳动物微粒体酶①，可弥补体外试验缺乏代谢活化系统之不足。鉴于化学物质的致突变作用与致癌作用之间密切相关，故此法现广泛应用于致癌物的筛选。
斑点试验 吸取测试菌增菌培养后的菌液0.1ml，注入融化并保温45℃左右的上层软琼脂中，需S9活化的再加0.3ml－0.4mlS9mix，立即混匀，倾于底平板上，铺平冷凝。用灭菌尖头镊夹灭菌圆滤纸片边缘，纸片浸湿受试物溶液，或直接取固态受试物，贴放于上层培养基的表面。同时做溶剂对照和阳性对照，分别贴放于平板上相应位置。平皿倒置于37℃温箱培养48h。在纸片外围长出密集菌落圈，为阳性；菌落散布，密度与自发回变相似，为阴性。
．平板掺入试验 将一定量样液和0.1ml测试菌液均加入上层软琼脂中，需代谢活化的再加0.3ml－0.4ml S9mix，混匀后迅速倾于底平板上铺平冷凝。同时做阴性和阳性对照，每种处理做3个平行。试样通常设4个～5个剂量。选择剂量范围开始应大些，有阳性或可疑阳性结果时，再在较窄的剂量范围内确定剂量反应关系。培养同上。同一剂量各皿回变菌落均数与各阴性对照皿自发回变菌落均数之比，为致变比（MR）。MR值≥2，且有剂量-反应关系，背景正常，则判为致突变阳性。
三, 问答题(共80分)
1、实验证明细菌对青霉素的耐药性，如何证明耐药性是由质粒介导的？,(10分)
利用溶菌酶和表面活性剂作用,破坏细胞壁中的糖肽层,同时使细胞膜崩解,此时细菌的染色体可以形成卷曲状折叠结构,附着在细胞膜碎片上,随后经过沸水浴快速作用,是蛋白迅速凝固将染色体包裹,离心除去,质粒DNA存在于上清中,加入无水乙醇,在-20℃放置30min,析出.琼脂糖凝胶电泳,确定质粒DNA.取一斜面菌,培养过夜,取0.5ml到新鲜M9培养基,培养2h,离心,冷的灭菌生理盐水洗涤,沉淀加GaCl2制得感受态菌液,取0.1ml加入0.1ml已稀释的DNA,冰浴30min.随即放入42℃水4min,冰浴1h,加入2VM9培养液,37表达2h,适当稀释,取0.1ml涂布于含氨苄青霉素和四环素的完全固体培养基上.同时取不加DNA的菌液及DNA,在相应的平板上对照,37培养。感受态菌如果生长良好，表示质粒DNA上有耐药性基因。
2、何为MHC的多态性? 试简述MHC多态性与抗原提呈的关系.(10分)
3、试比较枯草芽孢杆菌与酿酒酵母的区别,并从形态学角度加以描述(注: 试卷中两个菌的名称用的时拉丁文)(15分)
4、如何进行灭菌抗生素中的微生物检查?(15分)
无菌检查法 是检查检查药品与辅料是否无菌的一种方法。各种注射剂，输液，手术眼科制剂都必须保证无菌。包括①直接接种法和②膜过滤法。
① 取该品种正文最大规格量的供试品不少于2瓶。原料药按制剂规格项下，取最大规格量2份，分别加入足够使抗生素灭活的无菌的酶溶液，如青霉素可用青霉素酶处理，摇匀，分别等量接种于每管装有量40ml的需气菌、厌气菌，真菌培养基中，再做好阳性对照。培养。观察是否有菌生长。
② 取该品种正文最大规格量的供试品不少于2瓶，原料药按制剂规格项下，取最大规格量2份，分别按药品项下规定的方法处理后，加入0.9%灭菌NaCl溶液至少100ml或其他适宜溶剂中，摇匀，以无菌操作装入装有直径约50mm，孔径不大于0.45+0.02μm微孔滤膜的薄膜过滤器内,减压抽干后,用0.9%灭菌NaCl溶液至少100ml或其他适宜溶剂冲洗滤膜3次,取出滤膜,分成4片,分别放在需气菌、厌气菌，真菌培养基中,还有阳性和阴性对照.
5、Influential virus 的形态学特征如何? 试简述其复制过程.; H5N1型病毒的致病性与免疫性如何?并说明如何制备其灭活疫苗?(30分)
流行性感冒病毒呈球形或丝状，球形颗粒直径约80-120nm，丝状长短不一。单链—RNA病毒。核心：-DNA和蛋白质组成的核糖核酸，分8个片断；
包膜：具脂质双层的包膜，上有血凝素（hemagglutinin，HA）和神经氨酸酶（neuraminidase，NA）等包膜子粒；负链H5N1
2007年复试 微生物学与生物技术
12道名解 （60） 和 6道大题 （90） 共150分
名解：（记一个算一个）
1.五个拉丁文写菌名 （酿酒酵母 枯草 肺炎链球 金黄色葡萄球 还一个不会）
2.外毒素 内毒素 类毒素 （两年都考了）
外毒素—细菌细胞在生长繁殖过程中分泌到胞外培养液中的毒性蛋白，主要由G+细菌产生。
内毒素 是G-细菌细胞壁成分中的脂多糖，细菌自溶或裂解后，脂多糖释放出来。
类毒素 一些经变性或经化学修饰而失去原有毒性而仍保留其抗原性的毒素。
3.CPE（细胞病变效应） 表位
4.ATCC 美国标准菌种收藏所
CFU colony formine unit ,菌落形成单位，将稀释后的一定量的菌液通过浇注或涂布的方法，让其内的微生物单细胞一一分散在琼脂平板上，待培养后，每一活细胞就形成一个菌落。
5.TSA——肿瘤特异性抗原 肿瘤细胞特有的或只存在于某种肿瘤细胞不表达的新抗原。
TD-Ag 胸腺依赖性抗原——在刺激 B 细胞产生抗体时需要 T 细胞的辅助，所以称为 TD-Ag 。（分子量大，表面多重抗原决定簇、可诱生多类Ig、可诱发体液和细胞免疫、课引起记忆反应。）
NA 神经氨酸酶 位于病毒体包膜上的糖蛋白，以疏水末端插入脂质双层，抗原性不稳定，易发生变异，与HA一起时甲型流感v分亚型的依据。主要功能：1.参与病毒释放。2.促进病毒扩散（破坏细胞膜上的受体）。3.NA的相应抗体不能中和v的感染，但能抑制酶的水解。
HA 血凝素 呈柱状，能与人、鸟、猪豚鼠等动物红细胞表面的受体相结合引起凝血，故而被称作血凝素。
6.考斯克隆
7.限制酶 许多细菌用切割外来DNA的方法进行自我保护，如切割感染性噬菌体的DNA。这些细菌产生一种能切割DNA的核酸内切酶，一旦发现外来DNA便将其切割，因此它们有效地限制了噬菌体对细菌的感染，故这种核酸内切酶被称为限制酶。（凡能识别并切割双螺旋DNA分子内特定核苷酸顺序的酶统称为限制酶。）
8.微载体培养 微载体以细小的颗粒作为细胞载体，通过搅拌悬浮在培养液内，使细胞在载体表面繁殖成单层的一种细胞培养技术。
9.固定化生长态细胞 所谓固定化细胞技术，就是将具有一定生理功能的生物细胞，例如微生物细胞、植物细胞或动物细胞等，用一定的方法将其固定，作为固体生物催化剂而加以利用的一门技术。固定化细胞与固定化酶技术一起组成了现代的固定化生物催化剂技术。
10，11.12
感受态细胞; competent cell）：理化方法诱导细胞，使其处于最适摄取和容纳外来DNA的生理状态。
同步生长
一步生长、
二次生长 大肠杆菌在含乳糖和葡萄糖的培养基中，优先利用葡萄糖，并只有当葡萄糖耗尽后才开始利用乳糖，这就形成了在两个对数生长期中间的第二个延迟期，即出现了“二次生长”现象。
转基因动物 一种生物（通常是老鼠），将外来基因转入其体内成为其基因组的一部分。引入的基因先被分离出来并设计使其携带适当片段。然后将这段基因注入受精卵，对一只雌老鼠注射激素使其产生大量卵；让一只雄老鼠与其交配使部分卵受精；将这些卵收集起来，在其卵裂前注入外来基因物质。这些卵被移植入另一个雌性体内，在那里它们发育成型。在某些卵里基因物质在随意位点与染色体整合而成为老鼠细胞的遗传物质。由这种卵发育成的动物将携带该基因从而成为转基因动物。（将体外构建的DNA分子通过显微注射、病毒载体转移、或转胚胎干细胞等方法注入动物细胞的受精卵或着床前的胚胎细胞，然后将此受精卵或胚胎再植入受体动物的输卵管或子宫中，使其发育成携带外源基因的转基因 动物。）
大题：
1.酵母的细胞水平分类 菌落特征 生活史（图示） 细胞结构 作为工程菌如何培养
菌落表面湿润、光滑，一般较粘稠，易被挑起。一般为圆形，呈乳白色或乳黄色。
细胞结构：细胞壁，细胞膜，线粒体，内质网，液泡，细胞核[/BuyView]
2.HBV（图示病毒结构并说明）的形态 生物学特征 基因工程方法制造HBV疫苗 和 其致敏机理
电镜下呈3种颗粒，①球状，直径约42nm，是完整的HBV颗粒；②小球形颗粒，直径约22nm，仅由HBsAg组成，不含DNA，无感染性；③管形颗粒，聚合的小球形颗粒。
（2）核心：dsDNA，3200bp，一长一短，长为+DNA，短为-DNA；，双层衣壳。核酸基因为双股未闭合的环状DNA，
3.诱导酶产生的机制 诱导物作用机制 （图示） （估计用基因调控回答吧）
4.生物技术药物的种类 定义 。 目前我国批准上市的此类药物 举例说明
现代生物学发展及其与相关学科交差融和的产物，其核心是以DNA重组技术为中心的基因工程，还包括微生物工程、生化工程、细胞工程及生物制品等领域。生物技术药物主要是用现代生物技术制成的用于预防、诊断、治疗的药品。
主要是重组蛋白质药物（有IFN-α，白介素2，EPO，，人胰岛素，生长激素）、人血液代用品、治疗性抗体药物（抗EGFR人源化单抗），重组可溶性受体和黏附分子药物（Anti-CD3 鼠源单抗）、反义寡核苷酸药物、疫苗（乙肝疫苗，霍乱疫苗）
5.分子筛 亲和 离子交换 三种层析方法定义 比较 具体蛋白质样品如何选择此类方法
分子筛将样品混合物通过一定孔径的凝胶固定相，由于各组分经体积的差异，使不同分子量的组分得以分离的层析方法。根据生物分子的大小来实现蛋白分离纯化。用于脱盐、分级分离及分子量的测定。（分离蛋白质的分子量范围广，不与溶质发生作用，凝胶可以反复使用）
亲和层析是利用生物体中大多数大分子物质具有与某些相应的分子专一性可逆结合的特性而建立的分离纯化技术。适用于成分复杂且杂质含量远大于目标物的混合物中提取目标物，还可以根据其生物功能将有活性与无活性的目标物分开。(大多使用于酶与激活剂、抑制剂、底物之间的契合，抗原和抗体之间的特异性结合，激素和激素受体之间的相互作用。)
离子交换法是利用溶液中各种带电粒子与离子交换剂之间结合力的差异进行物质分离的操作方法。要进行吸附必须使目的物粒子具有较强的结合力，而其他粒子没有结合力或者结合力弱。分辨率高、容量大、操作容易。
6.基因的获得方法，其特点比较（从目的基因获取方面回答 如PCR 化学合成 两种文库 AA序列反推 DNAshuffing 等）
化学合成法
PCR法 根据生物体内DNA复制原理在DNA聚合酶催化和dNTP参与下，引物依赖DNA模板特异性的扩增DNA。 可以在体外特异性的扩增目的基因片段，并可以在设计引物时引入合适的酶切位点和标签结构。
基因文库法 基因文库指某一特定生物体全部基因组的克隆集合，包括所有外显子和内含子序列。具体鸟枪法，将生物体全部基因组通过酶切分成不同的DNA片段，与载体连接构建重组子，转化宿主细胞，从而形成生物体的全部基因组DNA片段克隆。
cDNA法 提取生物体总mRNA，并以mRNA作为模板，反转录酶催化合成cDNA，将全部cDNA都克隆至宿主细胞而构建cDNA文库。
08年试题：
具体参见帖子：
http://www.ecpu.net/bbs/viewthread.php?tid=22959&extra=page%3D2
按照以往学长的传统将微生物与生化药学的试题复述出来以供下一届参考
一 名词解释（14*7=98分）
1 T4噬菌体的结构填空：共五个，书上有的
头部，尾领，尾鞘，尾髓，尾丝，尾板，尾刺
写出酿酒酵母和金葡菌（拉丁文）的属名和中文名
2 芽孢的定义和芽孢抗性的原因
①含水量低，蛋白质受热不易变性②芽孢壳致密且厚，通透性低③合成一些耐热的酶类④含有DPA盐，增加耐热性。
3 G+菌和G-菌的细胞壁结构
4 啤酒酵母的培养方法
5 基因文库 基因文库指某一特定生物体全部基因组的克隆集合，包括所有外显子和内含子序列。
6抗体库技术
7MHC多态性的定义及其和抗原呈提的关系
多态性是指在随机婚配的群体中，染色体同一基因座上有两种以上基因型，课编码两种以上的基因产物。
8 多克隆位点 质粒载体中由多个限制性内切酶识别序列排列形成的序列称之为多克隆位点。
10 固定化细胞
11、微囊化包埋法
12、抗体库技术
13、生物药物
’生物技术药物
14、插入失活效应二、
二 简答题（13*4=52）
1 末端代谢产物阻遏的分子机制和其应用
由于某种代谢途径末端产物的过量积累而引起酶合成的阻遏称为末端代谢产物阻遏。通常发生在合成代谢中，特别是在氨基酸、核苷酸和维生素的合成途径中十分常见。
在直线式的代谢途径中，末端产物引起代谢途径中的酶合成终止；分支代谢途径中，代谢途径分支点钱的公共酶收到所有分支途径末端产物的共同阻遏。
在大肠杆菌培养基中加入精氨酸，将阻遏精氨酸合成酶系。
末端代谢产物阻遏在微生物代谢调节中有着重要的作用，它保证了细胞内各种物质维持适当的浓度。当微生物以合成了足量的产物，或外界加入该物质后，就停止有关酶的合成，而缺乏该物质时，又开始合成有关酶。
2 质粒的定义和Ecoli（amp+)中质粒的不稳定的控制
3 固定化细胞和固定化酶相比的 优点和缺点
4 按照形状和大小进行分离的方法有那些并简述其原理
08微生物与生化药学复试题
一、名词解释（7’*14=98）
1、写名称
P117图5－35 ‘看图填空
拉丁文 属 中文名
酿（啤）酒酵母 Saccharomyces cerevisiae Saccharomyces
黄色葡萄球菌 Staphylococcus aureus Staphylococcus 金黄色葡萄球菌
2、芽孢的定义及抗性强的原因
3、G+和G-细胞壁的组成
4、啤酒酵母的培养方法
5、MIC、MBC、KCs的定义及测定方法
6、营养缺陷型 凡是自身不能合成的某种生长因子的微生物统称为营养缺陷型。
营养缺陷型菌株：在一些营养物质的合成能力上出现缺陷，因此必须在基本培养基中加入相应的有机营养成分才能正常生长的变异菌株。
7、何为MHC的多变态性？试简述MHC多态性与抗原呈提的关系？（06考过） ‘多态性而不是多变态性
8、基因组文库
9、次生代谢产物 ‘和周长林版的次级代谢产物是相同概念
10、微囊化包埋法
11、抗体库技术
12、生物药物 ’生物技术药物
13、多克隆位点
14、插入失活效应二、
问答13’*4=52
1、末端代谢产物反馈阻遏的分子机制？并举例说明其应用。 ‘ 注意与反馈抑制反馈调节的区别
2、何为质粒？重组基因E.coli（Amp+）的培养方法？如何研究质粒的稳定性？ ’ Amp+指能含青霉素基因，能 产生安苄青霉素
3、固定化细胞与固定化酶比较有何优点和不足？
4、依据分子大小和形状进行分离的方法有哪些？简述各自原理。
辅佐细胞在机体的免疫应答过程中起着十分重要的作用，能摄取、加工、处理抗原并将抗原信息提呈给T淋巴细胞，故又称为抗原提呈细胞（antigen-presenting cell,APC）。
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